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肝缺血(HI)小鼠模型

Mouse Model for Hepatic Ischemia (HI)

Hepatic ischemia/reperfusion; Liver ischemia

    • 編號DSI527Mu01
    • 物種Mus musculus (Mouse，小鼠)相同的名稱，不同的物種。
    • 原型物種Human
    • 來源缺血再灌注肝損傷
    • 模式動物品系SPF級Balb/c小鼠，雄性，周齡為6w~8w，體重為20g-25g。
    • 實驗分組實驗分六組：正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組三個劑量組。
    • 實驗周期4-6 weeks
    • 建模方法1 小鼠術前12 h禁食，自由飲水。
      2 3%戊巴比妥鈉80mg/kg腹腔注射麻醉，麻醉成功后將小鼠平躺在手術臺上膠帶固定四肢，將小鼠腹部術去毛，用碘酒和75％乙醇術區(qū)消毒。
      3 取腹正中切口1cm，打開腹腔，小心分離出肝臟供血的門靜脈和肝動脈。
      4 用無創(chuàng)血管夾夾閉門靜脈和肝動脈，0.5min后，肉眼可見阻斷葉明顯變白，說明阻斷成功，用止血鉗夾閉皮膚切口臨時關閉腹腔，同時將小鼠放在37℃恒溫加熱墊上保溫。
      5 完成持續(xù)缺血60min后，重新打開腹腔，迅速取出血管夾，恢復缺血肝血流，0.5min左右可見缺血區(qū)肝臟由白色逐漸恢復為鮮紅色表明再灌注成功，逐層縫合腹腔肌肉和皮膚關閉腹腔，完成手術。待小鼠清醒后放回飼養(yǎng)室飼養(yǎng)，密切關注小鼠的狀態(tài)及生存狀況并做好記錄。
      4.注意事項
      1 分離肝門時用棉簽分離，可避免對肝臟的損傷
      2術前禁食有利于手術進行
      3阻斷血流要一次成功，否則會造成缺血預處理，減輕損傷程度
      4取材時鑷子不要損傷肝臟
    • 應用用于研究肝部損傷模型
    • 下載英文說明書   中文說明書
    • 規(guī)格每例
    • 價格¥ 1200
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    • 肝缺血(HI)小鼠模型產品包裝(模擬)
    • 肝缺血(HI)小鼠模型產品包裝(模擬)
    • 肝缺血(HI)小鼠模型Fig. Analysis of Flow cytometric
    • Certificate通過ISO 9001、ISO 13485質量體系認證

    模型評價

    模型評價
    肝臟缺血損傷評分：
    0分：無肝細胞損傷
    1分：輕度損傷，特點為細胞質空泡化，病灶核固縮
    2分：中度損傷，血竇膨脹，細胞溶質空泡化，細胞邊界模糊
    3分：中度到重度損傷，凝固性壞死，大量血竇膨脹，紅細胞滲出到肝鎖，嗜伊紅細胞增多，中性白細胞著邊（附著于血管壁）
    4分：嚴重壞死，失去肝臟結構，肝索崩解，出血，嗜中性粒細胞滲入

    組織病理學

    組織病理學
    取肝左葉組織1.5cm×1cm×0.2cm于4%多聚甲醛溶液中固定24h后脫水，包埋，進行石蠟切片后行HE染色，tunel染色。作壞死評分。肝小葉結構嚴重破壞，網狀纖維支架塌陷，肝細胞壞死，空泡變樣，肝細胞索、肝竇充血腫脹，邊界不清，周圍有炎性細胞浸潤。

    標志因子水平

    生化指標檢測：分別檢測術后0h、3h、6h、12h、24h及72h小鼠鼠血清中ALT（谷丙轉氨酶）、AST（天門冬氨酸氨基轉移酶）的水平，γ-谷氨?；D移酶(GGT)，總膽紅素(T-Bil)，直接膽紅素(D-Bil)，間接膽紅素(I-Bil)，總膽汁酸(TBA)?。

    流式檢測：
    1. 樣本前處理
    ①剪碎：將消化液中的組織充分剪碎
    ②加入消化液：每個肝組織加入5ml消化液
    ③消化：37℃消化 45min
    ④ 中止：消化完的組織加入終濃度為10%FBS的1640 10ml，終止酶反應。
    ⑤過濾：將組織懸液經200目濾網過濾
    ⑥洗滌：收集單細胞懸液至于50ml EP管中，2000rpm 離心10min。
    ⑦疊層：用小鼠淋巴細胞分離液疊層處理
    ⑧ 收細胞：吸取位于中間的透明細胞層，FACs buffer 離心洗滌細胞一次。

    2. 流式染色：
    ①FcR封閉：加入1% FcR 阻斷劑（anti CD16/32 antibody），每樣本100ul。4℃ 孵育30min，FACs buffer 離心洗滌。
    ②樣本表面抗體工作液：
    配置混合抗體工作液，每樣本100ul；
    加入抗體工作液后，4℃ 孵育避光30min，FACs buffer 離心洗滌。
    PerCP anti-mouse CD11b
    PE/Cy7 anti-mouse Ly-6G
    FITC anti-mouse CD45
    PE anti-mouse F4/80

    3.樣本胞內染色：
    加入固定破膜液50ul，用槍頭輕柔吹打重懸，室溫避光45min。完成后，加入1x perm/wash buffer洗滌。
    4.染色完成，重懸細胞：
    樣本染色完成（每樣本使用200ul FACs buffer重懸），4℃ 避光保存，待上機。
    5.流式上機：
    上機樣本，收集總數目50萬/細胞。

    統(tǒng)計學分析

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