NF-κB（Nuclear Factor Kappa B）是一種轉(zhuǎn)錄因子，可通過不同的內(nèi)外細胞 刺激，如細胞因子，無氧化劑自由基，紫外照射，細菌和病毒產(chǎn)品等激活。激 活后的 NF-κB 進入細胞核，激活生物學功能基因的廣泛表達，已知在不同類型 的細胞中，在一定情況下超過 200 種基因以 NF-κB 為靶標。此外，NF-κB 對免 疫應答和炎癥反應的調(diào)節(jié)，增殖，遷移，以及細胞凋亡都起重要作用。且越來 越多的現(xiàn)象表明 NF-kB 在腫瘤形成過程中扮演重要角色。已在許多人類的惡性 腫瘤中檢測到 NF-kB 異常表達。近年來，許多研究都已集中在論證 NF-kB 激活 對信號轉(zhuǎn)導機制的功能性影響，NF-kB 已成為癌癥治療的重要靶標。

Cloud-Clone Corp.公司針對這一研究熱點，開發(fā)了一系列 NF-κB 的重組蛋 白和抗體以及 ELISA 定量檢測試劑盒。NF-κB 相關(guān)產(chǎn)品的研制及面市，為廣大 科研人員提供了系統(tǒng)的 NF-κB 研究工具體系。

下面簡要介紹一下 NF-κB 相關(guān)產(chǎn)品的技術(shù)開發(fā)過程。

首先，將 NF-κB 基因擴增且雙酶切后與 Cloud-Clone Corp.公司自主構(gòu)建的 大腸桿菌表達載體 pUSCNK-1 進行連接。轉(zhuǎn)化后經(jīng)測序比對確定正確性后，將 表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，并經(jīng) IPTG 誘導表達，因表達蛋白含有 His 標簽，采 用鎳柱純化，獲得不同種屬的 NF-κB 重組蛋白（RPB824Hu01, RPB824Hu02,  RPB824Mu01, RPB824Ra01, RPB824Ga01），并做 SDS-PAGE 驗證蛋白的分子量 以及純度。圖 2 是 RPB824Hu02 的 SDS-PAGE 驗證圖。

其次，分別用重組蛋白免疫小鼠，純化后制備出小鼠抗人（MAB824Hu22）， 小鼠抗大鼠（MAB824Ra21），小鼠抗雞（MAB824Ga21）的 NF-κB 高特異性單 克隆抗體。

最后，用不同種屬重組蛋白免疫家兔，獲得兔抗人（PAB824Hu01, PAB824Hu02），兔抗小鼠（PAB824Mu01），兔抗大鼠（PAB824Ra01）和兔抗雞 （PAB824Ga01）的 NF-κB 多克隆抗體。將獲得的多克隆抗體與生物素偶聯(lián)得到 (PAB824Hu71, PAB824Mu71) 偶聯(lián)抗體。將獲得的多克隆抗體與 FITC 偶聯(lián)得到 (PAB824Hu81, PAB824Mu81)。這些抗體都通過了 Western Blot 和 IHC 等方法 的驗證。用 PAB824Hu01 對血清樣本進行 WB 檢測，結(jié)果如圖 3 所示。用人心 臟組織進行 IHC 檢測結(jié)果展示于圖 4 中，結(jié)果顯示在人心臟組織中該蛋白主要 集中表達于細胞質(zhì)與細胞核中。

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