抗繆勒管激素（Anti-Mullerian Hormone，AMH）又稱繆勒管抑制物（Mullerianinhibiting  substance，MIS），一種二聚體糖蛋白，屬于組織特異性TGF-β超家族生長因子。AMH由產后女性卵巢顆粒細胞（ovarian granulosa cells）及男性睪丸支持細胞（male sertoli cells）表達分泌。在胚胎發(fā)育階段，AMH可調節(jié)生殖管道的分化和發(fā)育，對性別分化至關重要；出生后， AMH可調節(jié)男性睪丸間質細胞的功能；在成年女性中，AMH抑制原始卵泡的募集和竇卵泡的發(fā)育，防止卵泡過早耗竭。與其他TGF-β家族成員相似，AMH通過絲氨酸/蘇氨酸激酶Ⅰ型受體和Ⅱ型受體發(fā)揮生物學作用，尤其是絲氨酸/蘇氨酸激酶Ⅱ型受體(AMHRⅡ)。

實驗目的 Smad同源物9(SMAD9)被鑒定為AMH的相互作用因子，因此采用結合ELISA法檢測重組人AMH與重組人（Smad9）的相互作用。 

實驗步驟： 用含有0.01%BSA的PBS（pH 7.4）梯度稀釋AMH。將100uL樣本移入Smad9蛋白預包被的酶標板中，37℃反應2小時。棄去孔內液體，用PBST洗板3次。加入抗AMH的pAb后孵育1小時，棄去孔內液體，用PBST洗板3次。再加入HRP標記的二抗孵育后，棄去孔內液體，用PBST洗板3次。加入底物溶液，在37℃孵育15-25分鐘。最后，向孔中加入50μL終止液，并立即在450nm下讀數(shù)。 

實驗結果：AMH與Smad9的結合活性如Figure 1所示。

實驗結論：

AMH可與Smad9結合，且這種作用呈劑量依賴性。

參考信息：

云克隆抗繆勒管激素（AMH）活性蛋白貨號：APA228Hu01