云克隆產(chǎn)品常見問題——ELISA試劑盒篇
Q1. 試劑盒產(chǎn)品的規(guī)格有哪些?
A1. 在售試劑盒產(chǎn)品規(guī)格分為96T和48T。96T試劑盒含有12條板條,每條板條有8孔;而48T試劑盒含有6條板條,每個板條有8孔。
試劑組分如下:
Q2. 試劑盒收到后如何保存?
A2. 參見說明書[ 試劑盒的儲存及有效期 ]。
Q3. 樣本如何制備及保存?
A3. 參見說明書[ 標(biāo)本的采集與保存 ]
Q4. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合方法有哪些?
A4. 對于標(biāo)曲擬合推薦選用二項式、四參數(shù)方程、半對數(shù)和雙對數(shù)等擬合方法,可提供模板文件供老師們參考。
雙抗夾心試劑盒(二項式擬合)
http://nceyjp.cn/topic/201504010418350045.html
競爭抑制試劑盒(半對數(shù)擬合)
http://nceyjp.cn/topic/201805311354357651.html
Q5. 檢測溶液A、檢測溶液B、標(biāo)準(zhǔn)品可不可以反復(fù)凍融或重復(fù)使用?
A5. 檢測溶液A和檢測溶液B以儲液的形式保存以保證其穩(wěn)定性,一次實驗用多少則稀釋多少。例如:一次實驗用16孔,則可制備1.7mL的檢測液A工作液(多制備100μL)。保存剩余未稀釋的檢測溶液A和檢測溶液B供下次使用。
標(biāo)準(zhǔn)品中一旦加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液則不能保存供下次使用,因為低濃度的標(biāo)準(zhǔn)品在保存過程中很容易降解。我們的試劑盒提供了兩瓶標(biāo)準(zhǔn)品,客戶可以做預(yù)實驗時使用一瓶,剩下未加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的一瓶保存供下次使用。為了得到精準(zhǔn)的結(jié)果,重懸過的標(biāo)準(zhǔn)品只能使用一次。
Q6. 試劑盒組分是否包含樣本稀釋液?如果沒有,選用哪種稀釋液稀釋樣本?
A6. 試劑盒組分不包含樣本稀釋液,推薦選用0.01M PBS稀釋樣本。云克隆提供商品化的PBS,貨號是IS045。
如果老師想要自行配置,推薦 0.01M PBS的配方如下:
NaCl | 8g |
KCl | 0.2g |
Na2HPO4?12H2O | 3.63g |
KH2PO4 | 0.24g |
用雙蒸水定容至1L,混勻,調(diào)節(jié)pH至7.0-7.2。 |
Q7. 預(yù)實驗是否必須要做?
A7. 預(yù)實驗用于預(yù)測樣本中靶標(biāo)物的含量,以確定樣本最適稀釋比例。
對于血清血漿樣本,可以參考說明書中推薦的稀釋比例,直接檢測。而其它類型的樣本可能存在諸多影響靶標(biāo)物含量的干擾因素,如:組織樣本的干擾因素包括:組織類型、提取方式、刺激處理方式等;細胞樣本的干擾因素包括:細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量、采樣時間、刺激處理方式等;尿液&唾液&乳汁樣本的干擾因素包括:飲水量、采樣時間、采樣方式等。這些干擾因素均會直接影響樣本中靶標(biāo)物的濃度,建議實驗前先通過預(yù)試驗,預(yù)測樣本中靶標(biāo)物的含量,確定樣本最適稀釋比例,再進行正式實驗。還有一些特殊樣本,如:陰道灌洗液、精液、齦溝液,試劑盒生產(chǎn)廠家不易獲取,也不會用于試劑盒的驗證,且相關(guān)的研究報道不多,這類樣本也有必要先做預(yù)試驗,摸索合適的樣本稀釋比例,再開展正式實驗。
Q8. 如何設(shè)計ELISA預(yù)實驗?
A8. 預(yù)實驗推薦方案:
1)選定實驗樣本:預(yù)實驗一般通過測定少數(shù)有代表性的樣本來確定正式實驗方案。通常,不同組別的樣本由于處理或刺激,靶標(biāo)物的表達量會產(chǎn)生變化,建議從各組樣本中隨機選擇1-2例樣本。如果預(yù)實驗的試劑量有限,那么至少選兩例樣品,1例為理論上靶標(biāo)物含量最低組的樣品,另1例為理論上靶標(biāo)物含量最高組的樣品。
2)確定最適稀釋比例:可根據(jù)樣本中靶標(biāo)物的濃度,選擇5倍或10倍梯度稀釋,同時測定標(biāo)準(zhǔn)品。可選做完整的標(biāo)曲或部分濃度點(如空白孔、最低濃度孔、中間濃度孔及最高濃度孔)。將不同稀釋比例的樣本的O.D.值對比標(biāo)準(zhǔn)品O.D.值,各樣本在某一稀釋比例的O.D.值分布在標(biāo)曲中值附近,則此為最適稀釋比例。需要注意的是在做預(yù)實驗時,一定要設(shè)置標(biāo)曲,不設(shè)置標(biāo)曲,就如同在丈量時沒有尺一樣,無法通過比較確定最適稀釋比例。
Q9. ELISA試劑盒適用于測定哪些樣本
A9. 產(chǎn)品說明書第一頁[ INTENDED USE ]會給出適用的樣本類型。對于沒有提及的樣本類型,建議自行做預(yù)實驗確定是否適用。一般來說,只要目的物含量在試劑盒檢測范圍內(nèi)的生物樣本就可以用于檢測。
Q10. ELISA試劑盒樣本如何處理?
A10. 對于ELISA試劑盒樣本處理方法,請參考以下鏈接:
酶聯(lián)免疫吸附測定實驗(ELISA)常見樣本處理方法
常見樣本:血液樣本(血清、血漿)、組織勻漿、細胞裂解液、細胞上清、糞便、尿液以及腦脊液。
http://nceyjp.cn/topic/201804271043087152.html
酶聯(lián)免疫吸附測定實驗(ELISA)-特殊樣本處理方法
特殊樣本:痰液、肺泡灌洗液、唾液、紅細胞裂解液、乳汁、精漿、胸腹水以及植物樣本。
http://nceyjp.cn/topic/201805141347467275.html
Q11. 不同指標(biāo)的試劑盒的稀釋液、TMB、終止液是否可以混用?
A11. 洗液、TMB、終止液可以混用。其它試劑不能混用,推薦使用試劑盒中配套的試劑。
Q12. 是否有ELISA操作視頻供參考?
A12. 操作視頻如下:
雙抗夾心ELISA實驗操作視頻
鏈接:https://mp.weixin.qq.com/s/DI8DiNDZAo8Wr5ZMtUtJjQ
競爭抑制ELISA實驗操作視頻
鏈接:https://mp.weixin.qq.com/s/IQGa3twNZ9MsXJrgDbsggg
小樣本ELISA實驗操作視頻
鏈接:https://mp.weixin.qq.com/s/AmjiP1ooc0WKQtK-x-4-zQ
快捷型ELISA實驗操作視頻
鏈接:https://mp.weixin.qq.com/s/LOl7jO1vyo271ozBhSo_HA